Introdução e Objetivo

As técnicas de agricultura vêm sendo aprimoradas objetivando um aumento de produção sem haver a expansão das fronteiras agrícolas. Técnicas como o controle químico foi utilizada de maneira contínua e indiscriminada, provocando alterações no ambiente. Entretanto, estratégias de biocontrole podem ser vistas como alternativa que visam preservar, restabelecer ou copiar os mecanismos naturais do controle biológico na agricultura. Os gêneros de rizobactérias promotoras do crescimento de plantas (RPCP) mais estudados como agentes de controle biológico são: Pseudomonas, Azospirillum, Rhizobium e Bacillus. Os mecanismos de promoção de crescimentos podem ser: solubilização de fosfato, produção de compostos indólicos e fixação de nitrogênio em plantas não-leguminosas. Assim, o presente trabalho visa comparar diferentes concentrações de manipueira como meio de cultura no desenvolvimento do Bacillus subtilis e testar o inóculo produzido para 108 unidades formadoras de colônia por grama da amostra.

Metodologia

A manipueira utilizada como substrato foi obtida na fecularia de Araruna – Paraná e armazenada em geladeira até o momento de ser utilizada no processo. Três diferentes concentrações de manipueira foram escolhidas para os testes com a inoculação do Bacillus subtilis. Os três meios são compostos por manipueira, água e melaço, diferenciando-se nas porcentagens de manipueira em sua composição. As porcentagens de 75%, 45% e 25% foram escolhidas para o teste do inóculo. Após a produção e esterilização dos meios, um grama do pré-inoculo com as cepas das bactérias foi inoculado e levado a mesa shaker por 5 dias consecutivos. Diluições seriadas seguidas por plaqueamentos em nutriente ágar foram feitos durante esses 5 dias para o monitoramento do crescimento das bactérias no meio. A fórmula a ser utilizada para o cálculo das UFC por grama do meio será:(UFC/g) = número médio de colônias na placa X diluição da amostra X 10, onde o 10 significa que apenas 100 µL de suspensão serão plaqueados.

Resultados

A manipueira mostrou-se como uma alternativa viável quando utilizada como matéria-prima em processos biotecnológicos. Todos os testes demonstraram a alta capacidade de crescimento e permanência do microrganismo Bacillus subtilis nos meios produzidos. A concentração do componente biológico do inoculante líquido utilizado como pré-inoculo foi de 3x109 unidade formadora de colônia por grama da amostra (UFC/g). Contudo, os três meios chegaram a valores de até 3x1010 UFC/g em pelo menos um dos 5 dias de teste. O meio com 45% de manipueira, 45% de água e 10% melaço se destacou por chegar a concentração aproximada de 6x1011UFC/g depois de 96 horas em mesa shaker, confirmando a eficiência da manipueira como um meio de cultura para microrganismos. O meio representado pelas concentrações de 75% de manipueira, 16% água e 9% melaço iniciou a semana de contagem com uma concentração aproximada de 1x109 UFC/g, após 48 horas, a concentração passou a ser aproximadamente 5x1010 UFC/g. Porém, diferentemente dos outros dois meios testados, o meio com 75% de manipueira começou a decair em concentração após as 48 horas em mesa skaker, voltando a concentração de 6x108 UFC/g no quinto dia, resultado ainda assim eficiente para utilização em lavouras como biofertilizantes. O microrganismo utilizado, Bacillus subtilis, demonstrou-se também eficaz como componente biológico para processos biotecnológicos, pois em mesa shaker não há como sistematizar e controlar alguns fatores como temperatura e oxigênio dissolvido no meio, e mesmo assim suas concentrações ao final da semana de teste continuaram viáveis para aplicação em culturas, por apresentar mais de 1x108 UFC por grama do inóculo. Devido ao baixo pH do resíduo de manipueira, de 2 a 3, os três meios necessitaram de correção de pH, com solução de hidróxido de sódio 10%, anteriormente a inoculação das cepas de bactérias nos mesmos, pois a faixa de pH em que o Bacillus subtilis demonstrou-se maior crescimento foi o neutro (7).

Considerações Finais

A eficiência do produto biológico produzido será testada em trabalhos futuros em sementes de trigo para a análise das variáveis do desenvolvimento desse cultivo. As variáveis que serão testadas na avaliação do inóculo no trigo serão: taxa de germinação (TG), índice de velocidade de germinação (IVG), tempo médio de germinação (TMG), fitomassa fresca e seca das partes aéreas, das raízes e do total das plântulas, altura da planta e número médio de folhas por planta.