Introdução e Objetivo
O processamento de alimentos pode acarretar em perdas da qualidade da cor, em decorrência desse efeito, a adição de corantes para melhorar a aparência do produto é frequente. Nesse sentido, a determinação quantitativa de corantes como a tartrazina, é de fundamental importância, já que o uso indiscriminado desse aditivo pode causar prejuízos à saúde. A técnica de espectroscopia UV-Vis é alternativa a ser utilizada para a determinação quantitativa de tartrazina solubilizada em água, principal solvente encontrado em alimentos. A validação do método realizado neste trabalho foi feita de acordo com o International Conference on Harmonisation (ICH) aonde foram realizados testes de acurácia, linearidade, reprodutibilidade, repetibilidade, precisão intermediaria, limite de detecção e de quantificação.
Metodologia
Preparo das soluções e curva de calibração: Duas soluções de tartrazina foram feitas, através da diluição do corante em água. Um espectrofotômetro USB-650 Red Tide, foi utilizado para as leituras e a curva foi obtida através das absorbâncias definidas e da concentração de cada uma das 5 soluções utilizadas para obter a faixa analítica.
Procedimento de Validação Analítica: O procedimento avaliou a acurácia (testa a veracidade do método por meio da comparação com valor de referência), precisão (abordando a Repetibilidade – a robustez obtida em leituras inter-analistas e a Reprodutibilidade – robustez obtida em leituras inter-laboratorial), Limite de Detecção e Limite de Quantificação, de acordo com a metodologia do ICH. Foram utilizadas 3 soluções de Tartrazina, os valores de percentual de variância foram obtidos através do desvio padrão médio da leitura da solução em questão pela média das 6 leituras, essas médias foram comparados através da ANOVA.
Resultados
O método analítico se apresentou robusto e confiável com base no valor estatístico obtido pela análise de variância (ANOVA), os parâmetros experimentais foram seguidos de acordo com a metodologia proposta. A curva de calibração obteve um R2 > 0,95 (0,9905), a curva foi plotada através da regressão linear com equação de primeiro grau y = 44,898x - 0,0229, onde x é a concentração de Tartrazina e y é a absorbância no comprimento de onda usado no experimento.
Pelo método espectrofotométrico verificou que para leitura de Tartrazina o limite de detecção e de quantificação foram satisfatórios, 0,58 µg.L-1 e 0,018 µg.L-1 respectivamente, valores que mostram que o método se mostrou mais sensível do que o mesmo aplicado para determinação de curcumina (LD= 0.05 mg.L-1 e LQ=0.10 mg.L-1, SILVA-BUZANELLO,2015).
Os valores do desvio padrão relativo se encontram entre 0,30% e 1,81%, e a taxa de recuperação (Recovery rate) variou de 71,4% e 92,7%. Já os valores da repetibilidade e da reprodutibilidade ficaram próximos, os valores variaram de 0,39% e 3,03%, e de acordo com a análise de variância feita nos valores de absorbância demonstraram a linearidade estatística. Na precisão intermediária foi demonstrado que o método é preciso para análises realizadas em um mesmo dia ou em dias diferentes, estando a variação encontrada dentro dos limites especificados, pois através do tratamento estatístico foram demonstrado que o valor de F calculado para ambas as análises (repetibilidade e reprodutibilidade - 4,1137 e 8,6004 respectivamente), independente da concentração avaliada, foram menor do que o F tabelado (9,5521), indicando não haver diferenças significativas entre as porcentagens de desvio padrão relativo obtidas.
Considerações Finais
A validação do método de espectroscopia na região do ultravioleta visível, para determinar a concentração de tartrazina, foi realizada com sucesso quanto aos parâmetros propostos pelo ICH (acurácia, precisão, limite de detecção e quantificação). Este método é adequado para a quantificação da tartrazina, os limites de detecção e de quantificação foram satisfatórios, 0,58 µg.L-1 e 0,018 µg.L-1 respectivamente, valores que mostram que o método provou ser sensível e preciso.